In vitro adventitious shoot morphogenesis of the mexican Douglas-fir Pseudotsuga menziesii

Abstract

Pseudotsuga menziesii es una conífera de gran importancia ecológica y económica a nivel mundial. Sus poblaciones nativas en México enfrentan serias dificultades para su regeneración natural, por lo que el cultivo in vitro se plantea como estrategia alternative para favorecer su propagación y conservación. En este trabajo se comparó el efecto de dos combinaciones de auxinas y citocininas en la inducción de brotes adventicios y se caracterizó histológicamente el proceso organogénico. Se cultivaron embriones maduros en medio Schenk y Hildebrandt (SH) adicionado con 0.53/13.32 mM de ácido 1-naftalenacético (ANA)/ 6-benciladenina (BA) o ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D)/ cinetina (K). Los brotes se formaron vía organogénesis directa, tanto en el hipocótilo como en cotiledones. El número promedio de brotes se comparó entre tratamientos a los 90 y 130 días de cultivo y se encontró que la capacidad organogénica fue mayor en ANA/BA y que se extendió por un período de tiempo más largo que en 2,4-D/K, aunque estos últimos los brotes tuvieron una apariencia más vigorosa. El análisis histológico detallado mostró que el patrón morfogenético difirió dependiendo de la cercanía del tejido del explante al medio de cultivo; sin embargo, el proceso fue similiar independientemente del tratamiento. Se detectó la aparición secuencial de  promeristemoides, meristemoides en la superficie alejada del medio, así como amplia zonas meristemáticas y nódulos meristemáticos en los tejidos en contacto con el medio, que dieron lugar a los brotes. Debido a que los brotes formados incluyeron células de la epidermis y subepidermis embrionaria se propone un origen multicelular. Profundizar en la comprensión de los eventos celulares asociados a la organogénesis directa resulta importante para consolidar los protocolos de regeneración y futuras estrategias de mejoramiento.